9月21日晚，由文化和旅游部作为指导单位，江苏省委宣传部、江苏省文化和旅游厅、江苏省外办、江苏省文联、苏州市人民政府共同主办的第五届大运河文化旅游博览会开幕式系列活动在苏州宝带桥畔举行。省委常委、省委宣传部部长张爱军，省委常委、苏州市委书记曹路宝，省政府副省长徐缨，文化和旅游部产业发展司司长缪沐阳，省旅游协会会长张卫国，省委副秘书长仲红岩，省政府副秘书长刘建，省委宣传部副部长徐宁，省文旅厅党组书记、厅长杨志纯，省文联党组书记、副主席、书记处第一书记常胜梅，苏州市委副书记、市长吴庆文，省人大教科文卫委主任委员陆永泉，省政协文化文史和学习委员会主任邵建东，葡萄牙驻沪总领事夏思雅，西班牙驻沪总领事卡尔沃等领导嘉宾共同开启运博会大幕。
本届运博会在秉承前四届运博会的目标定位、活动主题和有效做法的基础上，聚焦保护传承弘扬大运河文化，推动文旅高水平融合、高质量发展，促进文旅市场加快全面复苏，努力建设文化强省和世界重要旅游目的地，按照“节俭、安全、精彩”的办展要求，更加注重内容形式创新，突出科技数字赋能，彰显国际参与元素，打造江苏文旅高质量发展走在前的鲜明标识和品牌载体。
开幕式主题演出《千年运河·戏曲荟萃》遴选运河沿线8省市11个戏曲剧种，邀请15位中国戏剧“梅花奖”获得者（其中两位“二度梅”）以戏曲连唱的形式，戏妆戏服精彩演绎千年运河的灿烂文化。
开场曲戏歌《运河颂》由“二度梅”获得者、苏剧名家王芳演唱，罗周作词，吴小平作曲，集结了江苏本土文艺名家的最强阵容，唱出作为“致富之河幸福之河”的大运河，“重焕生机又迎晨曦”的蓬勃面貌。
京剧《空城计》、昆剧《牡丹亭·惊梦》，展示了国粹和“百戏之祖”的艺术魅力。扬剧《夜奔》为扬剧名家李政成从其师裴艳玲先生处传承而来，别具清婉苍劲的魅力。
豫剧《大登殿》、黄梅戏《天仙配》、越剧《梁祝·十八相送》、锡剧《双推磨》，都是戏曲艺术蕴含中华优秀传统文化突出特性的体现，展现出运河人家对美好生活的向往追求。
评剧《黛诺》、吕剧《红嫂》、河北梆子《洪湖赤卫队》，坚持守正创新，传承红色基因，生动再现峥嵘岁月里的红色故事。
开幕式期间，还进行了夜游活动。观“宝带串月”，听吴侬软语《声声慢》，思苏州气质，品碧螺香茗，古桥唐韵，让与会嘉宾在浸润江南风情的沉浸式实景演出中，体验城、河、人、文共生的运河风貌。
搭乘金鸡湖游船，秋风吹动涟漪，伴着金鸡湖音乐喷泉全场景立体环绕声，配合“东方之门”建筑群灯光秀，在夜色的光影中浮动，熠熠生辉，月光码头边的运河美食集市里人头攒动……精彩“夜游”体验，带领与会嘉宾感受传统与现代结合“双面绣”城市苏州的繁华都市氛围。
9月22日起，运博会六大主题展览将全景式展现更为广泛的大运河“朋友圈”。运河城市文旅精品展带领公众“一站式”打卡各美其美的运河城市，“大运河元宇宙互动体验专区”“长三角高铁旅游小城”展区、“行运青年·运河生活节”等专题板块颇为吸睛。运河特色旅游产品展汇集运河沿线城市新型旅游装备、沉浸式文旅体验产品、乡村民宿及演艺产品。运河文旅产业展多维度展示因文旅消费需求变化而催生的新技术、新产品、新场景、新模式、新业态。运河非遗展生动呈现大运河非遗“见人见物见生活”的保护利用实践。“丝路与运河的邂逅”主题展从不同维度书写水韵江苏与世界文明交流互鉴新篇章。运河美食文化展体现“美食+”融合引领示范效能。
9月22日至23日，文旅深度融合发展背景下的大运河文化遗产保护传承研讨活动、大运河城市文旅消费论坛、大运河文旅投融资论坛等研讨交流活动，文旅行业专家学者、资深实践者将荟萃一堂，深入研讨感知大运河与时代浪潮同频共振的跳动脉搏。运博会期间，“水韵江苏·运河行”、 “苏州之夜”大运河文旅嘉年华、“江南小剧场”体验活动、运河古镇秋游季以及全省各市其他配套活动将联袂上演，让千年运河文脉绽放“走在前，做示范”的时代风采。
文化和旅游部有关司局负责同志，江苏省省级机关有关部门和单位、省属国有文化企业负责同志，大运河沿线省（市）和兄弟城市政府、宣传部门、文旅部门负责同志，部分国家驻华使节和文旅机构代表，国内相关文化旅游组织和机构以及新闻媒体代表等200余人出席开幕仪式和相关活动。
